Bluetongue disease in sheep: a review / O vírus da língua azul em ovinos: uma revisão

The present review aims to show the main aspects related to bluetongue virus (BTV) infection in sheep. The bluetongue (BT) is a viral, infectious, and non-contagious disease caused by a virus (BTV) of the Orbivirus genus, transmited by a hematophagous vector of the Culicoides genus, to domestic and wild ruminants, mainly to sheep, the most susceptible species. It is caused by the association of endemic with climate conditions, with high temperatures and humidity. Economic loss is directly linked to death, abortion, weight loss, loss of milk, and meat production, and, indirectly, to the restriction on the export of animals and their by-products. The study concludes that the BTV is worldwidely spread, and probably persists due to the warm and humid climate that leads to the proliferation of Culicoides sp., being necessary to adopt measures that reduce the risk factors associated to the BTV infection.(AU)

A presente revisão objetivou apresentar os principais aspectos relacionados à infecção causada pelo vírus da língua azul em ovinos. A língua azul é uma doença viral, infecciosa e não contagiosa, causada por um vírus (BTV) do gênero Orbivírus, transmitida por meio de vetores hematófagos do gênero Culicoides a ruminantes domésticos e selvagens, principalmente aos ovinos, a espécie mais susceptível. A infecção ocorre de forma endêmica, associada a condições climáticas com elevada temperatura e umidade. As perdas econômicas estão ligadas diretamente à morte, ao abortamento, à perda de peso, à perda na produção de leite e carne, e, indiretamente, devido à restrição na exportação de animais e seus subprodutos. O estudo conclui que a língua azul está disseminada mundialmente e persiste, provavelmente, devido ao clima quente e úmido que propicia a proliferação de Culicoides sp., sendo necessário adotar medidas que diminuam os fatores de risco associados à infecção pelo vírus.(AU)

Use of the enzyme gamma-glutamyl transferase (GGT) as an indirect measure of passive transfer of immunity in holstein calves and association with the occurrence of diarrhea after birth / Uso da enzima gama-glutamiltransferase (GGT) como medida indireta de transferência de imunidade passiva em bezerras da raça holandesa e associação com a ocorrência de diarreia após o nascimento

The objective of this study was to determine the gamma-glutamyl transferase (GGT) levels and its relationship with diarrhea and passive transfer of immunity in Holstein calves within 24 hours and 30 days of life from Leopolis municipality, the north Parana region. Colostrum is rich in immunoglobulins and vital for immunity to newborn calves, since bovine placenta does not allow the passage of immunoglobulin to the fetus. Calves undergo various challenges that can lead to disease and death in the first month of life, including diarrhea. Diarrhea has a multifactorial etiology, and the passive immunity transferred through ingestion of colostrum is able to protect the calf against many of these etiologic agents. GGT measurements indirectly infer the amount of immunoglobulin ingested by the calf. Higher serum GGT levels (381.72 IU / L) were found at 24 hours, and a significant reduction was observed at 30 days (66.22 IU / L). When the presence or absence of diarrhea was associated with GGT levels above and below 200 IU / L, no statistical significance (P> 0.05) was observed, since 80% of animals with diarrhea had serum GGT levels higher than 200 IU / L. Under the conditions of this study, there was no relationship between the GGT concentration and the occurrence of diarrhea, and no mortality was observed despite some animals presented diarrhea.

O colostro é rico em imunoglobulinas e vital para a imunidade de bezerros recém-nascidos, uma vez que placenta bovina não permite a passagem de imunoglobulinas para o feto. Os bezerros são submetidos a diversos desafios que podem levar à doença e morte no primeiro mês de vida, dentre as quais a diarreia. A etiologia da diarreia é multifatorial e a imunidade passiva transferida através da ingestão de colostro é capaz de proteger o bezerro contra muitos desses agentes etiológicos. O objetivo deste estudo foi determinar a dosagem de gama-glutamil transferase (GGT) e sua relação com diarreia e a transferência de imunidade passiva em novilhas da raça Holandesa nos tempos de 24 horas e 30 dias de vida, no município de Leópolis, na região norte do Paraná. As mensurações de GGT infere indiretamente a quantidade de imunoglobulinas ingeridas pelo bezerro. Os níveis séricos de GGT demonstraram valores médios maiores 24 horas após o nascimento (381,72 UI / L) e uma redução significativa foi observada aos 30 dias de vida (66,22 UI/L). Quando a presença ou ausência de diarreia foi associada com níveis de GGT acima e abaixo de 200UI/L, não foi observado significância estatística (p>0,05), uma vez que 80% dos animais com diarreia tinham níveis séricos de GGT superior a 200 UI/L. Sob as condições que foi realizado o presente estudo, não houve relação entre a concentração de GGT e a ocorrência de diarréia, e nenhuma mortalidade foi observada apesar de alguns animais apresentarem diarreia.

Caracterização molecular de DNA de Delta papillomavirus bovino (BPV1, 2 e 13) em sarcoides equinos / Molecular characterization of bovine Deltapapillomavirus (BPV1, 2, and 13) DNA in equine sarcoids

Sarcoides são tumores fibroblásticos, considerados os tumores de pele mais comuns em pele de equinos e que raramente apresentam regressão espontânea. Papilomavírus bovino (BPV) tipos 1 e 2 são relacionados com a patogenia do sarcoide e, provavelmente, o BPV tipo 13 (BPV13), recentemente descrito, também pode estar associado com a formação dessa lesão. Neste estudo, 20 amostras de lesões cutâneas, sendo 12 constituídas por tecidos frescos e 8 amostras de tecido fixado em formalina e embebido em parafina, provenientes de 15 cavalos foram utilizadas para a identificação do DNA de BPV. A análise histopatológica (HE) confirmou todas as lesões como sarcoide. Para a amplificação do DNA de papilomavírus (PV) foram realizadas três reações de PCR. Como triagem, os primers IFNR2/IDNT2 foram utilizados para amplificar um fragmento da ORF L1 do PV. O segundo par de primersutilizado é complementar a sequência dos genes E5 e L2 de BPVs 1, 2 e 13. O terceiro par de primers(FAP59/FAP64) utilizado tem o gene L1 como alvo. A primeira e a segunda PCRs permitiram amplificar produtos em todas as amostras avaliadas. Entretanto, na terceira reação, na qual foram utilizados os primers FAP, foi possível amplificar produtos com tamanho molecular esperado somente nas amostras constituídas por tecidos frescos. O sequenciamento de nucleotídeos e as análises filogenéticas realizadas nos fragmentos E5L2 resultaram na identificação de BPV1, 2 e 13 em 14 (70%), 2 (10%) e em 4 (20%) amostras de sarcoides, respectivamente. As amostras de sarcoides de um dos animais continha somente o DNA de BPV1. Entretanto, nas amostras provenientes do segundo cavalo foi possível identificar o DNA de três tipos de Deltapapillomavirus bovino (BPV1, 2 e 13) em lesões distintas. Este estudo ratifica a presença do DNA de BPV1, 2 e 13 em lesões de sarcoides em equinos, além de identificar três tipos de BPVs em um mesmo animal e descrever pela primeira vez no Brasil a presença de BPV1 e 2 nesse tipo de lesão.

Sarcoids are fibroblastic lesions, which are considered as the most common skin tumors of horses; spontaneous regression rarely occurs. The bovine papillomavirus (BPV) types 1 and 2 may be involved in the pathogenesis of sarcoids, and probably the recently described BPV type (BPV13) might be associated with the pathogenesis of this lesion. This study characterized the DNA of BPVs in sarcoids from 15 horses from Brazil by analyzing 20 cutaneous lesions (12 recently collected; 8 from formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissues). Histopathology confirmed the proliferative lesions as sarcoids. Three PCRs were performed to amplify papillomavirus (PV) DNA. For screening, the primers IFNR2/IDNT2 were used to amplify a fragment of the PV L1 ORF. The second primer set was complementary to a common sequence of the E5L2 genomic region of BPV1, 2, and 13. The third primer pair (FAP59/FAP64) targeted a fragment of the PVs L1 ORF. The screening and E5L2 PCRs yielded amplicons in all samples evaluated. The FAP amplicons identified BPV1, 2, and 13 only from fresh tissue samples. The phylogenetic analyses of E5L2 resulted in the identification of BPV1, 2, and 13 in 14 (70%), 2 (10%), and 4 (20%) sarcoids, respectively. Two horses demonstrated multiple lesions: the sarcoids of one of these contained only BPV1 DNA and those of the other contained three types of bovine Deltapapillomavirus (BPV1, 2, and 13). This study confirmed the presence of BPV1, 2, and 13 DNA in equine sarcoids. Moreover, these findings represent the first description of three types of BPV diagnosed in the same horse, as well as the first confirmation of BPV1 and 2 in horses from Brazil.

Identification of canine papillomavirus type 1 (CPV1) DNA in dogs with cutaneous papillomatosis / Identificação do DNA de Papillomavirus canino tipo 1 em cães com papilomas cutâneos no Brasil

Canine oral papillomavirus (COPV), also known as Canine Papillomavirus type 1 (CPV1), induces papillomas at the mucous membranes of the oral cavity and at the haired skin of dogs. The classification of Papillomavirus (PV) types is based on the L1 capsid protein and nucleotide sequence; so far, 14 CPV types have been described in several countries, but the molecular characterization of CPV in Brazil is lacking. This study investigated the presence of the PV in seven papillomas from four mixed breed dogs from Londrina/PR, Southern Brazil, by partial sequencing of the L1 gene. Seven exophytic cutaneous lesions were surgically removed and processed for histopathological and molecular characterization. Histopathology confirmed the lesions as viral papillomas due to typical histological features. Polymerase Chain Reaction (PCR) assay using the FAP59 and FAP64 primers targeted the L1 gene followed by sequence analysis of the amplicons identified CPV1 in all evaluated papilloma samples. This study represents the first description of CPV1 DNA associated with canine papillomatosis in Brazil.

O papilomavírus oral canino (COPV), também denominado Papillomavirus canino tipo 1 (CPV1), tem a capacidade de induzir papilomas na mucosa da cavidade oral e também em pele de cães. A classificação dos tipos de papilomavírus (PV) é baseada na proteína L1 do capsídeo e na sequência de nucleotídeos que a codifica. Atualmente são descritos 14 tipos de CPV, no entanto, ainda faltam estudos moleculares relacionados à identificação dos tipos de CPV no Brasil. O objetivo deste estudo foi investigar a presença de PV em fragmentos de papilomas obtidos de quatro cães sem raça definida, provenientes de Londrina/PR, região sul do Brasil, e definir o tipo viral por meio da análise da sequência parcial de nucleotídeos do gene L1. Sete lesões cutâneas foram cirurgicamente removidas e processadas ​​para a caracterização histopatológica e molecular. O exame histopatológico confirmou as lesões como papilomas. Foi realizada reação em cadeia de polimerase (PCR), utilizando os primers FAP59 FAP64 para a amplificação parcial do gene L1, seguida por análise das sequências dos produtos amplificados, que confirmou a presença do CPV1 em todas as amostras avaliadas. Este estudo representa a primeira identificação do DNA de CPV1 associado com papilomatose canina no Brasil.

Teat papillomatosis associated with bovine papillomavirus types 6, 7, 9, and 10 in dairy cattle from Brazil

This study describes the clinical, histopathological, and virological characterization of teat papillomatosis from Brazilian dairy cattle herds. Four types of bovine papillomavirus were identified (BPV6, 7, 9, and 10); one of these (BPV7) is being detected for the first time in Brazilian cattle.

Perfil da infecção pelo vírus da diarreia viral bovina (BVDV) em um rebanho bovino leiteiro de alta produção e com programa de vacinação contra o BVDV / Bovine viral diarrhea virus (BVDV) infection profile in a high production dairy herd with vaccination program against BVDV

A infecção pelo vírus da diarreia viral bovina (BVDV) foi avaliada em um rebanho bovino leiteiro de alta produção com histórico de problemas reprodutivos e de vacinação regular contra o BVDV. A identificação do vírus foi realizada por RT-PCR em soro sanguíneo e o perfil sorológico por vírus-neutralização. Inicialmente, 100% (n=692) dos animais do rebanho foram avaliados com relação à presença de infecção ativa pelo BVDV por meio da RT-PCR. Quatro meses após, todos os animais positivos (n=29) na primeira avaliação foram avaliados novamente pela RT-PCR, assim como todos os animais que nasceram (n=72) e os que apresentaram problemas reprodutivos (n=36) no intervalo entre a primeira e a segunda colheita de sangue. Os resultados finais do estudo possibilitaram identificar 27 animais transitoriamente infectados e três animais persistentemente infectados (PI). A sorologia, realizada apenas nos animais positivos na primeira avaliação pela RT-PCR e nas vacas que apresentaram problemas reprodutivos entre a primeira e a segunda RT-PCR, demonstrou grande flutuação nos títulos de anticorpos neutralizantes, além de soroconversão na maioria dos animais. Foram identificados aumentos nos títulos de anticorpos neutralizantes que variaram entre 3 e 8 log2, indicando infecção ativa no rebanho. A circulação viral no rebanho avaliado foi responsável pela expressão de sinais clínicos da esfera reprodutiva em animais com baixo título de anticorpos e consequente falha na proteção fetal. Os resultados demonstram que o controle da infecção pelo BVDV apenas por meio da vacinação regular em rebanhos com animais PI pode não ser eficaz na profilaxia dessa virose.

The profile of bovine viral diarrhea virus (BVDV) infection was studies in a high production dairy herd selected based on a history of reproductive failures and regular vaccination against BVDV. Virus identification was performed by RT-PCR and serological profile was determined by virus-neutralization (VN). Initially, 100% (n=692) of the animals in the herd were monitored for identification of an active infection by RT-PCR in sera. Four months later, all positive animals (n=29) were retested by RT-PCR, along with newly born animals (n=72), or those that had reproductive failures (n=36) in the interval. The RT-PCR assay identified 27 transiently infected animals and three persistently infected (PI). Serology performed only in positive animals in the first RT-PCR and in cows with reproductive failures between the first and second RT-PCR analysis, showed large variation VN antibody titers and seroconversion in most animals. Increases in VN titers were demonstrated, with variation between 3 and 8 log2, indicating virus circulation within the herd. Virus circulation in the vaccinated herd evaluated in this study was likely responsible for reproductive failures observed in cows with low VN titers and for fetal infections. These results demonstrate that control of BVDV infection by regular vaccination in dairy cattle herds with PI animals represents a great challenge for the prophylaxis of this infection.

Phylogenetic position of an uncharacterized Brazilian strain of bovine papillomavirus in the genus Xipapillomavirus based on sequencing of the L1 open reading frame

The use of PCR assays with degenerate primers has suggested the existence of numerous as yet uncharacterized bovine papillomaviruses (BPV). Despite the endemic nature of BPV infections, the identification of BPV types in Brazilian cattle is still only sporadic. However, in a recent analysis of a partial segment of the L1 gene, we observed notable diversity among the BPV types detected. The aim of this study was to determine the phylogenetic position of the previously identified wild strain BPV/BR-UEL2 detected in the state of Paraná in Brazil. Since previous analysis of the partial L1 sequence had shown that this strain was most closely related to BPV type 4, genus-specific primers were designed. Phylogenetic analysis using complete L1 ORF sequences revealed that BPV/BR-UEL2 was related to BPV types classified in the genus Xipapillomavirus and shared the highest L1 nucleotide sequence similarity with BPV type 4 (78 percent). This finding suggests that BPV/BR-UEL2 should be classified as a potential new type of BPV in the genus Xipapillomavirus.

Hematological and cerebrospinal fluid changes in cattle naturally and experimentally infected with the bovine herpesvirus 5

Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) meningoencephalitis is one of the main causes of mortality by encephalopathy in Brazilian cattle herds. However, the neurological signs observed are common to several encephalopathies and do not contribute decisively to a diagnosis. In order to verify hematological and cerebrospinal fluid (CSF) changes, blood and CSF samples from naturally and experimentally infected bovines were evaluated. In natural cases (n=17), the samples were collected only once, and in experimental cases (n=7), the samples were sequentially obtained throughout disease progression. While routine methods were used to examine the samples, BoHV-5 infection was confirmed by a PCR assay. Blood analyses did not reveal any consistent hematological alterations and the leukogram results occasionally showed increases in leukocyte and segmented neutrophil. Hyperfibrinogenemia was noted in all experimentally infected calves and in half of the natural cases. Pleocytosis with mononuclear cells was a remarkable finding in CSF collected from both groups of animals and was present even in experimentally infected calves that remained asymptomatic. Therefore, CSF evaluation can be used as an auxiliary method in ante-mortem BoHV-5 diagnosis.

A meningoencefalite determinada pelo herpesvírus bovino 5 (BoHV-5) é considerada uma das principais causas de mortalidade por encefalopatia em bovinos no Brasil. O diagnóstico clínico da infecção é difícil de ser realizado pois os sinais neurológicos ocasionados pela infecção com o BoHV-5 são comuns aos observados em encefalopatias bovinas de diferentes etiologias. Com o objetivo de determinar as alterações hematológicas e do líquido cefalorraquidiano, foram avaliadas amostras de sangue total e líquor colhidas de animais infectados tanto naturalmente quanto experimentalmente. Nos casos naturais da doença (n=17), as amostras foram coletadas apenas uma vez. Nos casos de infecção experimental (n=7), as amostras foram obtidas sequencialmente durante a evolução clínica da doença. Enquanto na análise das amostras clínicas foram empregadas metodologias rotineiras, a infecção pelo BoHV-5 foi confirmada em todos os animais incluídos nesse estudo por meio da técnica de PCR. As análises hematológicas não revelaram alterações consistentes e os resultados obtidos a partir do leucograma mostraram aumento ocasional de leucócitos e neutrófilos segmentados. A hiperfibrinogenemia pôde ser observada em todos os bezerros infectados experimentalmente e em metade dos casos naturais da doença. Diferentemente, a pleiocitose com predomínio de células mononucleares foi considerada um achado marcante nas amostras de líquor coletadas em ambos os grupos de animais, encontrando-se presente até mesmo nos bezerros infectados experimentalmente que permaneceram assintomáticos. Os resultados do presente estudo, obtidos tanto em condições de infecções naturais quanto experimentais, demonstraram que a avaliação do líquor cefalorraquidiano pode ser utilizada como método auxiliar para o diagnóstico ante-mortem da infecção pelo BoHV-5.

Neurological and epidemiological aspects of a BoHV-5 meningoencephalitis outbreak

Bovine herpesvirus 5 is a DNA virus that has been associated with meningoencephalitis in young cattle. While its clinical diagnosis is obscured by other major diseases that also produce similar neurological disease in cattle, the use of conventional virological techniques is hampered by the establishment of a lifelong latent infection in the host and the difficulty in differentiating BoHV-1 and BoHV-5. The aim of the current report is to describe the clinical and epidemiological aspects observed in a natural outbreak of BoHV-5 meningoencephalitis in a dairy cattle herd from Brazil. In the outbreak, the affected animals consisted of nine calves, which presented three possible forms of the neurological disease, subjectively classified as peracute, acute, and subacute/chronic. In contrast to conventional herpetic meningoencephalitis, characterized mainly by progressive multifocal brain dysfunctions, BoHV-5 infection resulted in focal non-progressive caudal brainstem dysfunction (pontomedullary syndrome) in an animal presented with subacute/chronic BoHV-5 meningoencephalitis. The evaluation of CNS tissue of affected calves through both histological examination and multiplex-PCR was able to confirm BoHV-5 infection. Additionally, the analysis of CSF samples through PCR allowed ante-mortem BoHV-5 diagnosis during the outbreak, which enabled the implementation of several measures of control for the disease.

O herpesvírus bovino 5 é um vírus DNA que tem sido associado a casos de meningoencefalite em bovinos jovens. Enquanto o diagnóstico clínico da doença é dificultado pelo fato de outras enfermidades importantes também determinarem quadro neurológico em bovinos, a utilização de técnicas virológicas convencionais no diagnóstico laboratorial tem sido inviabilizada pela latência viral que ocorre no hospedeiro e pela dificuldade em se diferenciar o BoHV-1 do BoHV-5. O objetivo deste relato é o de descrever alguns aspectos clínicos e epidemiológicos observados em um surto de meningoencefalite determinado pelo BoHV-5 em um rebanho bovino leiteiro do estado do Paraná, Brasil. Neste surto, nove bezerros afetados apresentaram três formas distintas da doença, subjetivamente classificadas como hiperaguda, aguda e subaguda/crônica. Diferentemente da meningoencefalite herpética convencional, caracterizada principalmente por disfunções cerebrais multifocais progressivas, a infecção pelo BoHV-5 resultou em disfunção focal não-progressiva do tronco encefálico (síndrome pontobulbar) em um animal apresentando a meningoencefalite subaguda/crônica por BoHV-5. As avaliações de tecido do sistema nervoso de bezerros afetados, por meio do exame histológico e da técnica de multiplex-PCR, confirmaram a infecção pelo BoHV-5. Adicionalmente, a análise de amostras de líquor por meio da PCR permitiu o diagnóstico ante-mortem da infecção pelo BoHV-5, fato que possibilitou a implementação de várias medidas de controle para a doença durante o surto.

A bovine teat papilloma specimen harboring Deltapapillomavirus (BPV-1) and Xipapillomavirus (BPV-6) representatives

The common occurrence of multiple papillomavirus infections has been shown in several studies involving the human host. However, investigations with the aim of identifying mixed papillomavirus infections in cattle have been conducted only recently. In the current work we describe a co-infection with two different bovine papillomavirus (BPV) types that was identified in a bovine teat papilloma. The skin wart was obtained from a cow belonging to a Brazilian beef herd. A PCR assay was carried out with the FAP primer pair, which amplifies a partial segment of the L1 gene (approximately 478 bp), and the amplicon was submitted to direct sequencing. Because nucleotide sequences with satisfactory quality scores were not obtained, the amplicon was cloned and further sequencing, involving ten selected clones, was performed. The sequence analysis of the cloned inserts revealed the presence of two different BPV types. BPV-1 (Deltapapillomavirus genus) was detected in six clones, while BPV-6 (Xipapillomavirus genus) was detected in four clones. This finding confirms the presence of BPV co-infection associated with cutaneous papillomatosis in cattle.

Em seres humanos, as infecções múltiplas pelo papilomavírus têm sido demonstradas em vários estudos. Em bovinos, somente recentemente foram conduzidas investigações com o objetivo de avaliar infecções mistas pelo papilomavírus. O presente trabalho teve como objetivo descrever a co-infecção por dois tipos de papilomavírus bovino (BPV) em um papiloma de teto. A amostra clínica foi obtida de uma vaca pertencente a um rebanho de corte localizado na região norte do estado do Paraná, Brasil. Inicialmente, a técnica de PCR foi realizada com o par de oligonucleotídeos iniciadores FAP, que amplificam um segmento do gene L1, sendo que o amplicon gerado foi submetido ao sequenciamento direto. Entretanto, como as sequências obtidas não apresentaram qualidade aceitável, o amplicon foi clonado e dez clones foram selecionados para um novo sequenciamento. A análise das sequências dos insertos revelou a presença de dois diferentes tipos de BPV. O BPV-1 (gênero Deltapapillomavirus) foi detectado em seis clones, enquanto o BPV-6 (gênero Xipapillomavirus) foi detectado em quatro clones. Esse resultado confirma a ocorrência da co-infecção pelo BPV associada a papilomas cutâneos em bovinos.

Multiple bovine papillomavirus infections associated with cutaneous papillomatosis in brazilian cattle herds

Cutaneous papillomatosis is a pathological condition commonly found in cattle and is characterized by the presence of benign proliferative tumors caused by bovine papillomavirus (BPV) infection. While multiple infections with human papillomavirus (HPV) are common in healthy and immunodeficient humans, studies with the aim of identifying mixed infections are still sporadic in veterinary medicine. The aim of this study is to describe the occurrence of multiple BPV infections in cattle affected by cutaneous papillomatosis. Fifteen skin warts were collected from at least two diverse anatomical regions of six bovines with papillomatosis belonging to three cattle herds from the Paraná state in Brazil. The BPV types present in the skin wart samples were determined by a PCR assay performed with the FAP primer pair for partial L1 gene amplification followed by direct sequencing or by cloning and sequencing of the inserts. Sequence analysis of the obtained amplicons allowed the identification of four characterized BPV types (BPV-1, -2, -6, and -8) and three previously described putative new BPV types (BPV/BR-UEL3, BPV/BR-UEL4, and BPV/BR-UEL5). Double infections were identified in four (A, B, D, and E) of the six animals included in this study. In this work, the strategy adopted to evaluate skin warts from diverse anatomical sites of the same animal allowed the identification of multiple infections with two or three different BPV types. The analysis of four animals belonging to a single cattle herd also showed the presence of six different viral types. These results clearly suggest that both multiple papillomaviral infection and a high viral diversity can be as frequent in cattle as in human beings.

A papilomatose cutânea é comumente observada nos rebanhos bovinos e caracterizada pela presença de tumores proliferativos benignos causados pela infecção pelo papilomavírus bovino (BPV). Enquanto a infecção múltipla pelo papilomavírus humano (HPV) é um achado comum tanto em seres humanos saudáveis quanto em pacientes com imunodeficiência, na medicina veterinária esses relatos ainda são escassos. O objetivo desse estudo foi descrever a ocorrência de infecções múltiplas pelo BPV em rebanhos afetados pela papilomatose cutânea. Quinze papilomas foram obtidos, de pelo menos duas regiões anatômicas diferentes, de seis bovinos com papilomatose e provenientes de três rebanhos de corte localizados no estado do Paraná, Brasil. Os tipos virais presentes nas lesões foram identificados por PCR, utilizando o par de oligonucleotídeos iniciadores FAP, seguidos de sequenciamento direto ou clonagem e novo sequenciamento dos insertos. A análise das sequências obtidas permitiu a identificação do BPV-1, -2, -6 e -8, além de supostos novos tipos (BPV/BR-UEL3, BPV/BR-UEL4, e BPV/BR-UEL5), descritos anteriormente. Infecções por dois tipos diferentes de BPV foram identificadas em quatro animais (A, B, D e E) dos seis incluídos nesse estudo. A estratégia adotada neste estudo permitiu a identificação de infecção múltipla por dois ou três diferentes tipos virais do BPV no mesmo animal. Além disso, a avaliação de quatro animais de um mesmo rebanho demonstrou a presença de seis tipos virais circulantes. Esses resultados sugerem que tanto as infecções múltiplas quanto a grande diversidade viral podem ser frequentes nos bovinos, assim como o observado nos humanos. O reconhecimento da multiplicidade e complexidade das infecções pelo BPV pode colaborar para o entendimento dos aspectos epidemiológicos, clínicos e imunológicos da papilomatose cutânea nos rebanhos bovinos.

Validation of a PCR Assay for Chlamydophila abortus rRNA gene detection in a murine model

Chlamydophila abortus (C. abortus) is associated with reproductive problems in cattle, sheep, and goats. Diagnosis of C. abortus using embryonated chicken eggs or immortalized cell lines has a very low sensitivity. Polymerase chain reaction (PCR) assays have been used to detect C. abortus infection in clinical specimens and organ fragments, such as placenta, fetal organs, vaginal secretions, and semen. The aim of this study was to develop a PCR assay for the amplification of an 856-bp fragment of the rRNA gene of the Chlamydiaceae family. The PCR assay was evaluated using organs from 15 mice experimentally infected with the S26/3 reference strain of C. abortus. The results of the rRNA PCR were compared to the results from another PCR system (Omp2 PCR) that has been previously described for the Omp2 (outer major protein) gene from the Chlamydiaceae family. From the 15 C. abortus-inoculated mice, 13 (K=0.84, standard error =0.20) tested positive using the rRNA PCR assay and 9 (K=0.55, standard error=0.18) tested positive using the Omp2 PCR assay. The detection limit, measured using inclusion-forming units (IFU), for C. abortus with the rRNA PCR (1.05 IFU) was 100-fold lower than for the Omp2 PCR (105 IFU). The higher sensitivity of the rRNA PCR, as compared to the previously described PCR assay, and the specificity of the assay, demonstrated using different pathogenic microorganisms of the bovine reproductive system, suggest that the new PCR assay developed in this study can be used for the molecular diagnosis of C. abortus in abortion and other reproductive failures in bovines, caprines, and ovines.

Chlamydophila abortus (C. abortus) é frequentemente associada a distúrbios reprodutivos em bovinos, ovinos e caprinos. Para o diagnóstico, os métodos de cultivo em ovo embrionado de galinha e em células de linhagem contínua apresentam baixa sensibilidade. A reação em cadeia da polimerase (PCR) tem sido utilizada em placenta, órgãos fetais, secreção vaginal e sêmen para o diagnóstico da C. abortus. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um sistema de PCR para a amplificação de um fragmento de 856-pb do gene rRNA da família Chlamydiaceae. A PCR foi avaliada em órgãos de 15 camundongos infectados experimentalmente com a estirpe de referência S26/3 da C. abortus. Os resultados foram comparados com os obtidos em outro sistema de PCR, previamente descrito para o gene Omp2 (outer major protein) da família Chlamydiaceae. Dos 15 camundongos inoculados com C. abortus, 13 (K=0,84, erro padrão=0,20) foram positivos na rRNA PCR e nove (K=0,55, erro padrão=0,18) na Omp2 PCR. O limite de detecção da C. abortus na rRNA PCR (1,05 UFI) foi 100 vezes inferior à Omp2 PCR (105 UFI). A maior sensibilidade em comparação ao sistema de PCR anteriormente descrito, bem como a especificidade demonstrada frente a diferentes microrganismos patogênicos do sistema reprodutivo, abrem a perspectiva da utilização da PCR desenvolvida nesse estudo para o diagnóstico molecular da C. abortus em casos de abortamentos e outros distúrbios reprodutivos em bovinos, ovinos e caprinos.

Investigation of the possible role of Chlamydophila abortus in reproductive failures in nrazilian herds of domestic ruminants

Chlamydophila abortus (C. abortus) infection is related to reproductive failure in domestic ruminants. Although it has not been well characterized worldwide, this pathogen has already been identified in some European countries and in the USA. In Brazil, preliminary studies have shown serological evidence of C. abortus infection in herds with low antibody prevalence. Until now, the identification of C. abortus in biological samples from females presenting reproductive failures has not been described in Brazilian herds of domestic ruminants. The aim of this study was to evaluate the presence of the C. abortus in a collection of abortions from cattle (n=85), sheep (n=12), and goats (n=8), in samples of vaginal mucus from cows (n=13), sheep (n=90), and goats (n­=20), and in semen from sheep (n=10) and goats (n=5). The specimens (n=243) were evaluated using a PCR assay developed to amplify the 16S-23S rRNA intergenic space of C. abortus. A PCR assay with an internal control, which amplifies a fragment from the ND5 gene of bovine mitochondrial DNA, was used in order to evaluate the efficiency of the DNA extraction and of the PCR reaction. All biological samples (n=243) included in this study were negative for C. abortus in the PCR assay. The internal control enabled the amplification of a product from the bovine mitochondrial ND5 gene in all cattle abortion samples (n=85). Given the serological evidence indicating the presence of C. abortus infection in Brazilian herds of domestic ruminants, and considering the wide sampling evaluated, the failure to identify C. abortus in this survey suggests that the frequency of clinical signs in infected animals may be low or even absent.

A infecção pela Chlamydophila abortus (C. abortus) em ruminantes domésticos está relacionada com distúrbios reprodutivos. Apesar de ainda pouco estudada em todo o mundo, a infecção já foi identificada em alguns países europeus e também nos EUA. No Brasil, estudos preliminares demonstraram evidências sorológicas da infecção em alguns rebanhos com baixa prevalência de anticorpos. Até o momento ainda não foi possível a identificação de C. abortus a partir de material biológico proveniente de fêmeas com problemas reprodutivos em rebanhos brasileiros. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença da C. abortus em uma coleção de abortos bovinos (n=85), ovinos (n=12) e caprinos (n=8), em amostras de muco vaginal bovino (n=13), ovino (n=90) e caprino (n=20), e em sêmen ovino (n=10) e caprino (n=5). As amostras biológicas (n=243) foram avaliadas por meio de técnica de PCR desenvolvida para a amplificação do espaço intergênico 16S-23S RNAr da C. abortus. Um controle interno da reação, que amplifica um fragmento do gene ND5 do DNA mitocondrial de bovino, foi utilizado para a avaliação da eficiência da extração e da amplificação do DNA nas amostras provenientes de abortamento bovino. Todas as amostras biológicas (n=243) incluídas nesse estudo resultaram negativas para a C. abortus na PCR. O controle interno da reação possibilitou a amplificação de um produto do gene ND5 mitocondrial bovino em todas as amostras de aborto bovino (n=85). Apesar de evidências,,sorológicas indicarem a presença da infecção por C. abortus em rebanhos de ruminantes no Brasil, e considerando o número de amostras biológicas avaliadas, a não identificação de C. abortus nesse estudo sugere que a frequência de sinais clínicos nos animais infectados pode ser baixa ou mesmo ausente.

Identification of the recently described new type of bovine papillomavirus (BPV-8) in a Brazilian beef cattle herd: [revision] / Identificação do novo tipo de papilomavírus bovino (BPV-8) recentemente descrito num rebanho bovino no Brasil: [revisão]

Bovine papillomavirus type 8 (BPV-8) was first detected and described in teat warts as well as in healthy teat skin from cattle raised in Japan. The entire viral genome was sequenced in 2007. Additionally, a variant of BPV-8, BPV-8-EB, was also identified from papillomatous lesions of a European bison in Slovakia. In Brazil, despite the relatively common occurrence of BPV infections, the identification and determination of viral types present in cattle is still sporadic. The aim of this study is to report the occurrence of the recently described BPV-8 in Brazil. The virus was identified in a skin warts obtained from a beef cattle herd located in Parana state, southern Brazil. The papilloma had a macular, non-verrucous gross aspect and was located on the dorsal thorax of a cow. Polymerase chain reaction (PCR) was performed using generic primers for partial amplification of L1 gene. The obtained amplicon (480bp) was cloned and two selected clones were sequenced. The nucleotide sequence was compared to existing papillomaviral genomic sequences, identifying the virus as BPV type 8. This study represents the first report of BPV-8 occurrence in Brazil, what suggests its presence among Brazilian cattle.

A primeira descrição do papilomavírus bovino tipo 8 (BPV-8) foi realizada em amostras de papilomas de teto e de pele saudável de tetos de bovinos no Japão. Em 2007, a seqüência genômica completa do BPV-8 foi determinada. Ainda em 2007, uma variante do BPV-8 (BPV-8-EB) foi identificada em lesões papilomatosas de um bisão europeu na Eslováquia. No Brasil, apesar da infecção pelo BPV ser comumente observada em bovinos, a determinação dos tipos virais associados com a infecção ainda é esporádica. Este estudo tem o objetivo de relatar a ocorrência do BPV-8 no país. A amostra clínica foi obtida em um rebanho de corte do estado do Paraná, região sul do Brasil. O papiloma cutâneo, de aspecto macular e não-verrucoso, estava localizado na região dorsal torácica do animal. A identificação do vírus foi realizada pela reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando primers genéricos para a amplificação parcial do gene L1. O produto amplificado, com aproximadamente 480 pb, foi clonado e os fragmentos presentes em dois clones foram seqüenciados. A comparação da seqüência de nucleotídeos com a de outros papilomavírus demonstrou 100 por cento de identidade com o BPV-8. Assim, esta é a primeira descrição da ocorrência do BPV-8 no Brasil, o que sugere a sua presença nos rebanhos bovinos brasileiros.

Bovine herpesvirus 5 detection by virus isolation in cell culture and multiplex-PCR in central nervous system from cattle with neurological disease in Brazilian herds

Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is an important cause of meningoencephalitis in young and adult cattle. The multiple etiology of neurological disturbances in cattle makes the quick and conclusive diagnosis of BoHV-5 infection important for animal and public health, mainly because of herbivore rabies that is endemic in Brazilian cattle herds. The objective of this retrospective study was to use a multiplex-polymerase chain reaction (multiplex-PCR) for BoHV-5 and BoHV-1 glycoprotein C gene detection from stored central nervous system (CNS) tissue fragments of cattle with neurological clinical signs. Forty-seven frozen CNS samples of young and adult cattle from 31 herds in three Brazilian geographical regions (South, Southeast, and Center-west) were evaluated. Eighteen (38.3 percent) of these CNS samples were BoHV-positive by virus isolation in cell culture. By multiplex-PCR 30 (63.8 percent) CNS samples were BoHV-5 positive. All 18 positive samples by virus isolation were confirmed as BoHV-5 by the multiplex-PCR, that provided a increase of 25.5 percent (12/47) in the BoHV-5 diagnosis rate. BoHV-1 was not detected in any CNS sample. This retrospective study demonstrated the wide regional distribution of BoHV-5 infection in Brazilian cattle herds since positive results were obtained in CNS samples of cattle with neurological disease from Paraná, São Paulo, Minas Gerais, Mato Grosso, and Mato Grosso do Sul States.

O herpesvírus bovino 5 (BoHV-5) é um importante agente etiológico de meningoencefalite em bovinos jovens e adultos. A etiologia múltipla dos distúrbios neurológicos em bovinos torna o diagnóstico conclusivo do BoHV-5 importante tanto em termos de sanidade animal quanto de saúde pública, principalmente pela característica endêmica da raiva dos herbívoros nos rebanhos bovinos brasileiros. O objetivo desse estudo retrospectivo foi utilizar a reação em cadeia da polimerase (multiplex-PCR) para a detecção do gene da glicoproteína C do BoHV-5 e do BoHV-1 em fragmentos estocados de sistema nervoso central (SNC) de bovinos com sinais clínicos neurológicos. Foram avaliadas 47 amostras congeladas de fragmentos de SNC de bovinos jovens e adultos pertencentes a 31 rebanhos de três regiões geográficas brasileiras (Sul, Sudeste e Centro-oeste). Por meio do isolamento viral em cultivo celular foi possível o isolamento do BoHV em 18 (38,3 por cento) amostras. Pela técnica de multiplex-PCR 30 (63,8 por cento) amostras de SNC foram positivas para o BoHV-5. Todas as 18 amostras positivas no isolamento viral foram confirmadas como BoHV-5 pela multiplex-PCR, proporcionando um incremento na taxa de diagnóstico do BoHV-5 de 25,5 por cento (12/47). Em nenhuma das amostras avaliadas foi possível a identificação do BoHV-1 pela multiplex-PCR. Esse estudo retrospectivo demonstrou a ampla distribuição da infecção pelo BoHV-5 nos rebanhos bovinos brasileiros uma vez que resultados positivos foram obtidos em amostras de SNC colhidas de bovinos com doença neurológica, provenientes dos estados do Paraná, São Paulo, Minas Gerais, Mato Grosso e Mato Grosso do Sul.

Análise filogenética de papilomavírus bovino associado com lesões cutâneas em rebanhos do Estado do Paraná / Phylogenetic analysis of bovine papillomavirus associated with skin warts in cattle herds from the state of Paraná

A infecção pelo papilomavírus bovino (BPV) causa lesões hiperplásicas no epitélio cutâneo dos animais. De acordo com a localização e as características morfológicas das lesões, os seis tipos de BPV são classificados em dois sub-grupos. O objetivo desse trabalho foi identificar os tipos de BPV presentes em lesões cutâneas em bovinos de rebanhos do Estado do Paraná. Os primers degenerados FAP59 e FAP64 foram utilizados para a amplificação de um fragmento com 478 pb do gene L1 do BPV bovino em nove amostras de papilomas cutâneos obtidos de seis animais provenientes de quatro rebanhos bovinos do Estado. Em todas as amostras foi possível a amplificação de um produto com a massa molecular esperada. Por meio da análise filogenética das seqüências dos amplicons foi possível identificar o BPV-2 em três amostras, o BPV-1 em uma e o BPV-6 em cinco amostras de papilomas. O BPV-6 foi encontrado tanto em papilomas localizados no teto quanto em outras partes do corpo. Em um dos animais, do qual foram colhidas mais de uma amostra, foi detectada infecção concomitante do BPV-1 com o BPV-2. As cinco amostras positivas para o BPV-6 apresentaram 100 por cento de identidade de nucleotídeos com a amostra padrão disponível no GenBank. No entanto, foram identificadas diferenças entre as amostras do BPV-2 e BPV-1 e aquelas depositadas neste banco de dados. Esse estudo demonstrou a diversidade de tipos do BPV circulantes em rebanhos do Estado do Paraná.

Bovine papillomavirus (BPV) infection causes hyperplastic lesions in the cutaneous epithelium of cattle. Six types of BPV were classified in two sub-groups, being correlated to the anatomical regions of the infection and morphologic characteristics of the lesions. The present study was carried out to identify the types of BPV present in skin warts of cattle from the state of Paraná, Brazil. The generic primers FAP59 and FAP64 were used for amplification of a 478 bp fragment of BPV L1 gene in nine cutaneous papilloma samples obtained from six animals in four herds. In all papillomas examined, a product with the expected molecular size was amplified. Phylogenetic analysis of the PCR products identified BPV-2 in three samples, BPV-1 in one, and BPV-6 in five papillomas. BPV-6 was detected in cutaneous papillomas of the teat and in other body parts as well. In one animal, from which more than one sample was collected, a concomitant infection by BPV-1 and BPV-2 was identified. The five positive BPV-6 samples showed a nucleotide identity of 100 percent with the sequence of the reference strain available in GenBank. However, differences among BPV-2 and BPV-1 Brazilian samples and the respective reference sequences deposited in GenBank were observed. Molecular comparison of the two BPV-2 strains identified showed the involvement of two viral variants. This study revealed the diversity of BPV types circulating in the state of Paraná.

Análise filogenética de papilomavírus bovino associado com lesões cutâneas em rebanhos do Estado do Paraná / Phylogenetic analysis of bovine papillomavirus associated with skin warts in cattle herds from the state of Paraná

A infecção pelo papilomavírus bovino (BPV) causa lesões hiperplásicas no epitélio cutâneo dos animais. De acordo com a localização e as características morfológicas das lesões, os seis tipos de BPV são classificados em dois sub-grupos. O objetivo desse trabalho foi identificar os tipos de BPV presentes em lesões cutâneas em bovinos de rebanhos do Estado do Paraná. Os primers degenerados FAP59 e FAP64 foram utilizados para a amplificação de um fragmento com 478 pb do gene L1 do BPV bovino em nove amostras de papilomas cutâneos obtidos de seis animais provenientes de quatro rebanhos bovinos do Estado. Em todas as amostras foi possível a amplificação de um produto com a massa molecular esperada. Por meio da análise filogenética das seqüências dos amplicons foi possível identificar o BPV-2 em três amostras, o BPV-1 em uma e o BPV-6 em cinco amostras de papilomas. O BPV-6 foi encontrado tanto em papilomas localizados no teto quanto em outras partes do corpo. Em um dos animais, do qual foram colhidas mais de uma amostra, foi detectada infecção concomitante do BPV-1 com o BPV-2. As cinco amostras positivas para o BPV-6 apresentaram 100 por cento de identidade de nucleotídeos com a amostra padrão disponível no GenBank. No entanto, foram identificadas diferenças entre as amostras do BPV-2 e BPV-1 e aquelas depositadas neste banco de dados. Esse estudo demonstrou a diversidade de tipos do BPV circulantes em rebanhos do Estado do Paraná.

Bovine papillomavirus (BPV) infection causes hyperplastic lesions in the cutaneous epithelium of cattle. Six types of BPV were classified in two sub-groups, being correlated to the anatomical regions of the infection and morphologic characteristics of the lesions. The present study was carried out to identify the types of BPV present in skin warts of cattle from the state of Paraná, Brazil. The generic primers FAP59 and FAP64 were used for amplification of a 478 bp fragment of BPV L1 gene in nine cutaneous papilloma samples obtained from six animals in four herds. In all papillomas examined, a product with the expected molecular size was amplified. Phylogenetic analysis of the PCR products identified BPV-2 in three samples, BPV-1 in one, and BPV-6 in five papillomas. BPV-6 was detected in cutaneous papillomas of the teat and in other body parts as well. In one animal, from which more than one sample was collected, a concomitant infection by BPV-1 and BPV-2 was identified. The five positive BPV-6 samples showed a nucleotide identity of 100 percent with the sequence of the reference strain available in GenBank. However, differences among BPV-2 and BPV-1 Brazilian samples and the respective reference sequences deposited in GenBank were observed. Molecular comparison of the two BPV-2 strains identified showed the involvement of two viral variants. This study revealed the diversity of BPV types circulating in the state of Paraná.